[操作步骤]

1、 加样：分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔7孔，依次加入100μL不同浓度的标准品(见试剂准备2)。空白孔加100μL(见试剂准备第二步最后一管)，余孔加待测样品100μL，酶标板加上覆膜，37^oC温育2小时。

3、 每孔加检测溶液A工作任务液100μL(临用前配制)，酶标板加上覆膜，37^oC温育1小时。

🗹4、 弃去孔内液体，每孔用350μL的洗滌液洗滌，净泡1-220分钟，吸去(不易涉及板壁)或甩掉酶标板内的固态，在实验室门外铺下几层储水纸，酶标板朝使用力拍数次(也可轻拍将孔内固态拍干)，从复洗板3次。第四一些洗滌后，要把孔内的洗滌液完成脱干。重新洗板机可以。

5、 每孔加检测溶液B事情液(临用前配制)100μL，加上覆膜，37^oC温育30分钟。

6、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，办法同部骤4。

7、 每孔加底物溶液90μL，酶标板加上覆膜，37^oC避光显色💯(反应时间控制在15-25分钟，不要超过30分钟。当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止)。

8、 每孔加终止溶液🔴50μL，中止体现，此时此刻浅蓝色立转成黄色。中止液的添加方式尽义务量与底物盐溶剂的添加方式同。如出现了色调不光滑一，请莞然抖动酶标板以使盐溶剂混合着不均。

♋9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在450nm可见光波长预估各孔的光比热容(O.D.值)。

注意：

1、 试剂准备：准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。

2、 加样：𒊎实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。加样时注意不要有气泡，将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。因此，一次加样时间(主要包括标准单位品及大部分供试品)较好掌控在10小时内。引荐使用复孔参与实验所。

3、 温育：꧑为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4、 洗涤𒀰：充分的洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实 验过程中。

5、 反应时间的控制：𓂃加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比方说，每过10分鐘分析一起)，如色调较深，请分批申请加入结束液结束损害，以防损害过强因此损害酶标仪光容重读数。

6、 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。

7、 如果实验室内湿度低于60%，网友推荐动用恒湿器从而提高空气湿度层次。